首先,我们要知道为什么现在越来越多的公司趋向于将各种蛋白冻干,是因为干粉状态下蛋白的稳定性较高,且要比液体试剂容易运输与储存,因此蛋白冻干已成为一个大的趋势。
那么由液体试剂变成干粉目前比较常用的方法就是低温真空干燥,去除水分达到干粉的形态,那么这个低温的环境下蛋白的结构就很容易改变,可能会影响蛋白的功能,所以冻干是要加保护剂的,不同种类保护剂的功能会不太一样.
欣谕冻干总结一下常用的冻干保护剂都有哪些?主要分为五大类:
一、PH缓冲剂,蛋白稳定性受ph的影响较大,在选择缓冲液大ph时候,尽量不要接近蛋白质的等电点,以避免蛋白的聚集,tris、组氨酸、柠檬酸盐在冷冻干燥过程中会显示较小的ph变化,一般选择的buffr溶液的ph为5.8-8.0即可。
二、填充剂,为了保证冻干品形成良好的结构防止产品坍塌,同时也为了增加配方的溶解性,所以填充剂必须是充分可溶并且是与蛋白是相容的,常用的填充剂是甘露醇、甘氨酸,牛血清白蛋白等。
三、糖类,糖类是蛋白冻干过程中的赋形剂,因为糖类物质中含有较多的羟基,可以取代蛋白质与水之间的氢键来提供稳定作用,一般是双糖,如蔗糖和海藻糖。
四、非离子表面活性剂,可以减少蛋白质的聚集,Z常用的是吐温80。
五、配体,有时候还会加一些配体来提高蛋白质的热力学稳定性。