层析冷柜在重组磷脂酶C的改性的应用

  层析冷柜在重组磷脂酶C的改性应用，其特征在于：包括以下步骤：

      1、修饰剂SSmPEG的制备：向烧瓶中加入2g分子量为5000的单甲氧基聚乙二醇mPEG，再加入4mLN，N二甲基甲酰胺，充分溶解；随后加入0.12g丁二酸酐，密封混匀，于100℃边搅拌边加热3h；待反应物冷却后于层析冷柜中逐滴加入10mL乙醚，将所得沉淀过滤干燥；干燥后的沉淀用二氯甲烷复溶，再用乙醚沉淀，重复四次；所得沉淀产物真空干燥，在干燥器中保存备用；将上述终产物溶于4mL N，N二甲基甲酰胺，加入0.46g N羟基琥珀酰亚胺和0.825g二环己基碳二亚胺，30℃溶解过夜，将反应产物置于层析冷柜中冷却至0℃，逐滴加入40mL乙醚，将所得沉淀过滤干燥；干燥后的沉淀用二氯甲烷复溶，再用乙醚沉淀，重复四次；终沉淀产物即为活化的聚乙二醇，将其干燥，备用；

      2、修饰酶的制备：将SSmPEG和磷脂酶C按0～30的摩尔比例溶解于体积为10mL，pH为7.2，浓度为25mM的TrisHCl缓冲液中，在室温下震荡反应一定时间，用透析袋4℃透析过夜，所得的修饰酶液冷冻干燥后备用。欣谕层析冷柜www.gy17.cn可定制非标层析柜。